今天百螢為大家介紹一下關(guān)于ELISA的小知識(shí)，什么是ELISA？ELISA的檢測(cè)方法有哪些？優(yōu)缺點(diǎn)是什么？最好用的ELISA檢測(cè)試劑/試劑盒是什么？感興趣的朋友一起來看看吧！
 

酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定法（ELISA）是一種使用酶標(biāo)儀進(jìn)行測(cè)定的免疫測(cè)定法，用于檢測(cè)和定量生物分子，例如抗體、蛋白質(zhì)、激素或肽，以及表征蛋白質(zhì)-蛋白質(zhì)和蛋白質(zhì)-核酸相互作用。在ELISA中，將用于實(shí)驗(yàn)的靶標(biāo)（通常是抗原）固定在固體表面上，然后用辣根過氧化物酶（HRP）或堿性磷酸酶（AP）的酶綴合抗體進(jìn)行檢測(cè)。通過與被酶催化的底物孵育來實(shí)現(xiàn)定量，從而產(chǎn)生可測(cè)量的副產(chǎn)物。

酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定（ELISA）概述

ELISA測(cè)定法通常在96孔板中進(jìn)行。這些板被設(shè)計(jì)成通常通過直接吸附到微量滴定板的表面上或間接地通過預(yù)先包被的抗體間接地結(jié)合和固定抗原。固定后，將一抗引入樣品中，與抗原形成免疫復(fù)合物。一抗可以共價(jià)標(biāo)記到酶（例如HRP）上，或者如果一抗被生物素標(biāo)記，則一抗本身可以使用酶標(biāo)記的二級(jí)抗體或鏈霉親和素偶聯(lián)物間接檢測(cè)。通過與合適的底物孵育來評(píng)估共軛酶的活性，從而實(shí)現(xiàn)檢測(cè)，該底物會(huì)產(chǎn)生可測(cè)量的副產(chǎn)物。試劑盒在靈敏度和成像設(shè)備的兼容性方面各不相同。

直接與間接檢測(cè)

在ELISA中檢測(cè)一級(jí)抗體-抗原復(fù)合物的方法可以是直接的或間接的（圖1）。在直接檢測(cè)方法中，與報(bào)告酶（例如HRP或AP）綴合的單一一抗可以直接檢測(cè)靶抗原。通過間接檢測(cè)，可以依次使用雙抗體系統(tǒng)檢測(cè)目標(biāo)靶標(biāo)。首先，將樣品與針對(duì)目標(biāo)抗原的未標(biāo)記一抗孵育。然后，使用一抗特異的酶標(biāo)二抗檢測(cè)其存在，從而檢測(cè)靶抗原。如果使用生物素化的一抗檢測(cè)抗原，則使用酶標(biāo)記的抗生蛋白鏈菌素偶聯(lián)物作為您的第二檢測(cè)試劑。

使用哪種檢測(cè)方法取決于靶抗原的表達(dá)水平。為了檢測(cè)高度表達(dá)的抗原，直接檢測(cè)是合適的方法。當(dāng)靈敏度至關(guān)重要時(shí)，例如檢測(cè)低豐度靶標(biāo)或表達(dá)不良的抗原，請(qǐng)使用間接檢測(cè)方法來增強(qiáng)信號(hào)。

圖1.使用靶標(biāo)特異性抗體進(jìn)行直接和間接抗原檢測(cè)的圖示。

ELISA的三種檢測(cè)方法

1.直接法

在直接ELISA中，抗原通過被動(dòng)吸附直接固定在板的表面，并使用HRP標(biāo)記的一抗進(jìn)行檢測(cè)。將無色底物引入樣品，該底物與酶結(jié)合物反應(yīng)，并產(chǎn)生可測(cè)量的副產(chǎn)物。根據(jù)底物的選擇，該副產(chǎn)物可以是比色的，化學(xué)發(fā)光的或熒光的。信號(hào)產(chǎn)生的大小與樣品中抗原的數(shù)量成正比。在所有ELISA法中，直接ELISA分析最簡(jiǎn)單，執(zhí)行最快，但靈敏度最低。

2.間接法

間接ELISA本質(zhì)上是直接ELISA的修改版本。在間接ELISA中，用于檢測(cè)抗原的一抗是未偶聯(lián)的。取而代之的是，對(duì)一抗的宿主物種具有反應(yīng)性的酶標(biāo)二級(jí)抗體被用于檢測(cè)一抗-抗原復(fù)合物（間接檢測(cè)抗原）。將無色底物引入樣品，該底物與酶結(jié)合物反應(yīng)，并產(chǎn)生可測(cè)量的副產(chǎn)物。根據(jù)底物的選擇，該副產(chǎn)物可以是比色的，化學(xué)發(fā)光的或熒光的。信號(hào)產(chǎn)生的大小與樣品中抗原的數(shù)量成正比。與直接ELISA相比，使用輔助檢測(cè)試劑具有明顯的優(yōu)勢(shì)，即信號(hào)放大。

3.夾心法

夾心ELISA分析是最常用的ELISA形式。它需要使用匹配的抗體對(duì)，從而每種抗體對(duì)抗原上不同的非重疊表位具有特異性。首先將一種抗體，稱為捕獲抗體，包被在多孔微量滴定板的表面上，以促進(jìn)靶抗原的固定。然后，第二種抗體（稱為檢測(cè)抗體）與捕獲抗體-抗原復(fù)合物結(jié)合。最后，添加對(duì)檢測(cè)抗體（而非捕獲抗體）具有特異性的酶標(biāo)記的第二抗體偶聯(lián)物。

通用ELISA測(cè)定試劑盒

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