微管蛋白是一種在維持細(xì)胞結(jié)構(gòu)和促進(jìn)細(xì)胞分裂中起著關(guān)鍵作用的蛋白質(zhì)。抑制微管蛋白聚合已被證明是抑制癌細(xì)胞增殖的有效策略。在以往的研究中，識別能夠抑制微管蛋白聚合的化合物需要利用純化的微管蛋白或固定細(xì)胞的免疫熒光分析進(jìn)行體外實(shí)驗。 
  2023年1月29日，美國Harutyun Khachatryan研究團(tuán)隊在Biomolecules雜志發(fā)表了文章Identifification of Inhibitors of Tubulin Polymerization Using a CRISPR-Edited Cell Line with Endogenous Fluorescent Tagging of β-Tubulin and Histone H1，提出了一種新的方法來識別微管蛋白聚合抑制劑，利用內(nèi)源性熒光標(biāo)記β-微管蛋白和組蛋白H1的CRISPR - Hela細(xì)胞系來鑒定微管蛋白聚合抑制劑。該方法有助于研究活細(xì)胞內(nèi)源性蛋白，而不使用細(xì)胞固定、免疫染色或重組蛋白過表達(dá)。

本研究使用β-微管蛋白（mCTover3）、組蛋白H1（mTagBFP2）和p62-SQSTM1（mRuby3）熒光蛋白， 用CRISPR和FAST-HDR載體系統(tǒng)開發(fā)HeLa細(xì)胞，采用Hana單細(xì)胞分離儀（Namocell）進(jìn)行單細(xì)胞分選，使用綠色熒光通道，并分選到96孔板中進(jìn)行單細(xì)胞克隆培養(yǎng)，然后選擇一個具有均勻明亮β-微管蛋白熒光的細(xì)胞克隆大量擴(kuò)增得到實(shí)驗細(xì)胞。
  后續(xù)實(shí)驗通過高內(nèi)涵成像分析來動態(tài)觀察微管蛋白聚合情況。用已知的微管蛋白聚合抑制劑、秋水仙堿和長春新堿處理此細(xì)胞，并證實(shí)了由此產(chǎn)生的微管蛋白聚合抑制的表型變化。此外，作者篩選了429個激酶抑制劑文庫，鑒定出三種抑制微管蛋白聚合的化合物（ON-01910、HMN-214和KX2-391）。
 
值得注意的是，研究中采用Namocell 單細(xì)胞分離儀幫助作者快速、輕柔、高效地獲得活性高的CRISPR - Hela單細(xì)胞，利于單克隆培養(yǎng)及擴(kuò)增，為后續(xù)更多實(shí)驗提供足夠的細(xì)胞工具。
  
Namocell單細(xì)胞分離儀
  

• 輕 柔 - 壓力小于2psi，保護(hù)細(xì)胞活性
• 快 速 - 分選快（1min），初始化快（2min），樣本切換快（1min）
• 精 準(zhǔn) - 配備2-11色熒光通道，精準(zhǔn)捕獲目的細(xì)胞
• 無 菌 - 一次性無菌芯片，隔絕樣本污染
• 輕 松 - 無需調(diào)校，開機(jī)即用
• 輕 巧 - 體積小巧，方便搬動

 
  Namocell 是一家成立于美國硅谷的專注于世界領(lǐng)先的單細(xì)胞分選技術(shù)的生物儀器公司，2022年7月加入Bio-Techne。公司自主研發(fā)的微流控單細(xì)胞分選平臺，使復(fù)雜的單細(xì)胞分選變得極其簡單快速，極大地推動了單細(xì)胞分析在基礎(chǔ)研究和臨床上的應(yīng)用。我們的單細(xì)胞分選儀已在細(xì)胞株的構(gòu)建，單克隆抗體的篩選，細(xì)胞基因編輯，基因及細(xì)胞治療，癌癥液體活檢，癌癥免疫治療，產(chǎn)前基因篩查，噬菌體展示，單細(xì)胞基因組學(xué)等多方面得到廣泛的應(yīng)用。目前Namocell微流控單細(xì)胞分選儀已經(jīng)被世界各大頂尖研究機(jī)構(gòu)及生物制藥公司廣泛應(yīng)用于生命科學(xué)研究的各個領(lǐng)域，例如美國國立衛(wèi)生研究院(NIH)，美國食品藥品監(jiān)督管理局 (FDA)，美國疾病控制與預(yù)防中心(CDC)，哈佛大學(xué)，斯坦福大學(xué)，麻省理工大學(xué)，Genentech，Merck，Biogen，BMS，Janssen，Boehringer-Ingelheim等。
 






  
原文鏈接：https://www.mdpi.com/2218-273X/13/2/249