生物指示劑（Biological Indicators, BIs）是評價滅菌過程有效性的核心工具，其生產(chǎn)與性能驗證需嚴(yán)格遵循ISO 11138標(biāo)準(zhǔn)，是確保生物指示劑的可靠性、穩(wěn)定性與可追溯性的關(guān)鍵。

本文延續(xù)上期對術(shù)語和定義的探討，完整闡述從菌懸液制備到抗力測定的全流程要求，為您揭示4大關(guān)鍵要點(diǎn)，助您避開生物指示劑滅菌監(jiān)測失敗的陷阱。

一、核心術(shù)語標(biāo)準(zhǔn)化定義——清晰界定是基礎(chǔ)
載體（carrier）：可負(fù)載試驗微生物的支持材料。
菌種保藏編號 （culture collection number）：由科學(xué)界公認(rèn)的菌種保藏機(jī)構(gòu)提供的試驗微生物的唯一編號。
活菌量（viable count）：實際可回收的菌落形成單位或其他合適單位的數(shù)量。
抗力儀（resistometer）：為測量滅菌過程中產(chǎn)生的物理和/或化學(xué)參數(shù)相關(guān)組合而設(shè)計的測量設(shè)備。
初級包裝（primary package）：包裝系統(tǒng)的一部分，用于維持產(chǎn)品的完整性。
注:保護(hù)染菌載體免受損壞和污染，而不阻礙滅菌因子穿透的系統(tǒng)。
次級包裝（secondary package）：為測量滅菌過程中產(chǎn)生的物理和/或化學(xué)參數(shù)相關(guān)組合而設(shè)計的測量設(shè)備。

二、生產(chǎn)規(guī)范要求——嚴(yán)控源頭保質(zhì)量
通過規(guī)范菌懸液制備工藝及全程質(zhì)控、嚴(yán)格執(zhí)行載體與包裝材料標(biāo)準(zhǔn)、強(qiáng)化染菌載體制造全流程管控，實現(xiàn)生物指示劑安全性和穩(wěn)定性的全面提升。

三、孢子數(shù)和抗力測定——關(guān)鍵指標(biāo)定成敗
（一）抗力試驗要求
1、明確目的保性能
抗力試驗的主要目的是證明每批次生物指示劑符合性能要求。
2、判定標(biāo)準(zhǔn)依規(guī)范
試驗要證明每批次生物指示劑滿足既定性能要求。在ISO 11138標(biāo)準(zhǔn)其他部分未明確規(guī)定抗力性能時，依據(jù)ISO 14937中特定關(guān)鍵變量定義抗力性能。
3、試驗全面重整合
抗力試驗不僅要測定抗力特性，還需整合活菌計數(shù)步驟，全面準(zhǔn)確地評估生物指示劑性能。
4、警示清晰明風(fēng)險
當(dāng)孢子數(shù)和/或抗力低于規(guī)定值時，產(chǎn)品標(biāo)簽上必須有明確警示，提醒使用者注意潛在風(fēng)險。

（二）試驗微生物與數(shù)量
1、微生物明確且精準(zhǔn)
必須清晰規(guī)定試驗微生物，并準(zhǔn)確確定其活菌數(shù)。
2、孢子數(shù)驗證有范圍
孢子數(shù)驗證通過的標(biāo)準(zhǔn)是測定結(jié)果在制造商標(biāo)稱值的50%-300%范圍內(nèi)，即使低于文件規(guī)定的最低孢子數(shù)要求，只要在此比例范圍內(nèi)仍視為合格。

（三）抗力特性測定
1、多種方法相結(jié)合
結(jié)合使用存活曲線測定D值、陰性分?jǐn)?shù)法測定D值以及驗證存活-殺滅反應(yīng)特性三種方法。
2、數(shù)值規(guī)定要達(dá)標(biāo)
測定結(jié)果需符合ISO 11138其他部分的規(guī)定，并在生物指示劑標(biāo)簽上至少標(biāo)注兩個相關(guān)數(shù)據(jù)。
3、標(biāo)定D值保穩(wěn)定
制造商提供的檢測方法測得的標(biāo)定D值在有效期內(nèi)應(yīng)保持在±20%的范圍內(nèi)。存活曲線雖允許一定誤差，但需維持在可接受的線性范圍內(nèi)。
4、存活曲線與抗性水平
計數(shù)法得到的存活曲線顯示活菌抗性超過5×101。陰性分?jǐn)?shù)法統(tǒng)計分析表明存活試驗中的微生物抗性低于計數(shù)法所得水平。兩種方法測得的D值間展現(xiàn)良好相關(guān)性，且與預(yù)期線性存活曲線無顯著偏差。
5、特定滅菌方式的額外要求
ISO11138其他部分可能針對特定滅菌方式增加要求，如z值。
6、D值驗證有范圍
在規(guī)定有效期內(nèi)，D值的確認(rèn)測試結(jié)果在±20%范圍內(nèi)即認(rèn)為初始D值通過驗證，即使低于文件定義的最小D值要求。
7、存活曲線應(yīng)準(zhǔn)確
用存活菌數(shù)的log10對時間所作的半對數(shù)曲線，其線性相關(guān)系數(shù)r²應(yīng)至少達(dá)到0.8。
8、試驗條件嚴(yán)控制
抗力特性的測定應(yīng)在指定的試驗條件下進(jìn)行，見表2。

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