文獻(xiàn)信息
近期，中國人民解放軍聯(lián)勤保障部隊(duì)第九四〇醫(yī)院基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)室、甘肅農(nóng)業(yè)大學(xué)生命科學(xué)技術(shù)學(xué)院等單位的研究成果“槲皮素對生長期小鼠峰值骨量和臟器病理學(xué)的影響”在雜志《西部醫(yī)學(xué)》上發(fā)表。平生公司的離活一體CT（NEMO）在論文中提供了小鼠股骨圖像和定量分析。

文獻(xiàn)摘要
目的：探究槲皮素對生長期小鼠峰值骨量和臟器病理學(xué)的影響。

方法：將40只SPF級C57雌性小鼠隨機(jī)分為對照組(Control)、槲皮素低劑量組(Q-20)、槲皮素中劑量組(Q-40)和槲皮素高劑量組(Q-80)4組，每組各4只。Q-20組、Q-40組和Q-80組分別每天灌胃20、40和80mg/kg槲皮素，Control組給予等體積蒸餾水。給藥6周后取材，分別觀察臟器系數(shù)、主要臟器病理學(xué)切片、骨組織病理學(xué)切片、分析Micro CT 和蛋白質(zhì)免疫印跡實(shí)驗(yàn)。

結(jié)果：槲皮素組主要的臟器系數(shù)與Control組相比,差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05);臟器病理學(xué)切片未發(fā)現(xiàn)明顯的病變和毒副作用;骨組織脫鈣切片Q-20組與Control組相比,脂肪細(xì)胞較少，骨小梁比較連貫和整齊;Q-20組、Q-40組和Q-80組的小鼠與Control組小鼠比較,數(shù)值在Tb.BMD、Tb.N、Tb.Th、Ct.BMD和Tb.BV/TV均有增加，但是Tb.Sp數(shù)值均有減少，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05);Q-20組的OSX、COL-1、Runx-2與BMP-2的表達(dá)最為明顯，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)。

結(jié)論：槲皮素可能是通過增加骨密度、改善骨微結(jié)構(gòu)、促進(jìn)骨形成、從而提高峰值骨量,并且對臟器沒有明顯的副作用。

實(shí)驗(yàn)方法
Micro CT 分析
小鼠取材時(shí),每組隨機(jī)挑出6根左側(cè)股骨固定在4%多聚甲醛中。固定好的樣本存放于4℃冰箱內(nèi)。實(shí)驗(yàn)時(shí)，用鑷子取出樣本并用紗布擦走多余的液體后，用干凈的紙巾將樣品包裹放入Micro CT（平生醫(yī)療科技有限公司）樣品艙中。掃描后得到大量層切圖片，再經(jīng)重建軟件進(jìn)行3D重建，截取最大剖面圖與橫截面圖。選擇骨骺線下1~1.5mm 處為感興趣區(qū)進(jìn)行分析，得到分析區(qū)域松質(zhì)骨的骨形態(tài)參數(shù)。選擇骨骺線下2.5~3mm 處為感興趣區(qū)進(jìn)行分析，得出該區(qū)域皮質(zhì)骨的骨形態(tài)參數(shù)。得到橫截面圖、最大剖面圖以及骨形態(tài)參數(shù)包括骨小梁骨密度(Tb.BMD)、骨小梁數(shù)(Tb.N)、骨小梁分離度(Tb.Sp)、骨小梁厚度(Tb.Th)、骨體積分?jǐn)?shù)(Tb.BV/TV)和皮質(zhì)骨厚度(Ct.Th)。

實(shí)驗(yàn)結(jié)果
Micro CT掃描及分析
股骨正中剖面圖(圖4)顯示,與Control組相比，給藥組的松質(zhì)骨比較致密，骨小梁數(shù)量增多，骨小梁間間距較小，骨小梁與骨小梁間的連續(xù)性與延展性較好。其中Q-20、Q-40和Q-80組股骨松質(zhì)骨的骨微結(jié)構(gòu)與Control組相比骨小梁數(shù)均有明顯增加的趨勢，骨小梁的連續(xù)性和延展性也有明顯的改善，其中可以明顯的看出Q-20組量的骨小梁數(shù)目最多,連續(xù)性和延展性也最好。從骨小梁橫切圖(圖5)顯示，Control組小梁比較稀疏，Q-20、Q-40和Q-80組與Control組相比更加緊密，其中Q-20組最為緊密和粗大。從骨小梁3D圖(圖6)看出Control組骨小梁數(shù)目明顯較少，Q-20、Q-40和Q-80組骨小梁數(shù)目明顯較多，其中Q-20組數(shù)目最多。從皮質(zhì)骨3D圖(圖7)和皮質(zhì)骨橫切(圖8)未發(fā)現(xiàn)Q-20、Q-40和Q-80組與Control組的明顯差異。通過比較松質(zhì)骨和皮質(zhì)骨的骨形態(tài)參數(shù)，發(fā)現(xiàn)Q-20、Q-40和Q-80組的小鼠與Control組小鼠比較,數(shù)值在Tb.BMD、Tb.N、Tb.Th和Tb.BV/TV均有增加，但是Tb.Sp數(shù)值均有減少，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，其中Q-20組效果最好，骨形態(tài)參數(shù)具有顯著差異(P<0.01)。數(shù)據(jù)中Ct.Th并無增長趨勢，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。見圖9。

使用結(jié)論
Micro CT是骨組織微觀結(jié)構(gòu)鑒定的新方法，可以從3D層面精準(zhǔn)的反映皮質(zhì)骨與松質(zhì)骨的微結(jié)構(gòu)。Micro CT有直觀、準(zhǔn)確和靈敏度高等特點(diǎn),是骨科基礎(chǔ)疾病研究常用的一種有效的可靠手段，特別在骨質(zhì)疏松癥相關(guān)的大小鼠實(shí)驗(yàn)中運(yùn)用最多。本實(shí)驗(yàn)以小鼠股骨為對象，分析最大剖面圖與立體3D重建圖，通過2D和3D的角度分析小鼠股骨的微觀結(jié)構(gòu)并得到準(zhǔn)確的松質(zhì)骨和皮質(zhì)骨量化指標(biāo)結(jié)果。直觀體現(xiàn)松質(zhì)骨和皮質(zhì)骨的微觀構(gòu)造，同樣得到皮質(zhì)骨和松質(zhì)骨量化數(shù)值。Micro CT結(jié)果顯示，槲皮素都能增加骨小梁數(shù)量、加大骨小梁厚度、減小骨小梁間距、加強(qiáng)骨小梁的連續(xù)性，使得松質(zhì)骨內(nèi)部的骨小梁更加緊致，在微觀層面加強(qiáng)骨質(zhì)量并提高骨強(qiáng)度。槲皮素可通過提高小鼠骨密度、優(yōu)化骨微結(jié)構(gòu)、促進(jìn)骨形成來提高PBM，并且對小鼠的主要臟器沒有明顯的病變和毒副作用。

使用設(shè)備

                                  Micro CT (型號：NEMO) (平生醫(yī)療科技)

                                          影像軟件：Avatar（平生醫(yī)療科技）